沧州崔尔庄枣业有限公司|金丝小枣|冬枣|梨枣|大雪枣|早脆王|鸡心枣|·行业信息

   1 主题内容与适用范围



    本标准规定了出口水果中赤霉素残留量检验的抽样、制样和荧光分光光度测定方法。

    本标准适用于出口柑桔中赤霉素残留量的检验。



    2 抽样和制样



    2.1 检验批

    以不超过1 500件为一检验批。

    同一检验批的商品应具有相同的特征,如包装、标记、产地、规格和等级等。

    2.2 抽样数量

    批量,件最低抽样数,件

    1～25 1

    26～100 5

    101～250 10

    251～1 500 15

    2.3 抽样方法

    按2.2规定的抽样件数随机抽取,逐件开启。每件至少取500g。作为原始样品,原始样品总量不得少于2kg。加封后,标明标记,及时送实验室。

    2.4 试样制备

    将所取混合原始样品缩分出1kg,取可食部分,经组织捣碎机捣碎,均分成两份,装入洁净容器内,作为试样。密封,并标明标记。

    2.5 试样保存

    将试样于－18℃以下冷冻保存。

    注：在抽样和制样的操作过程中,必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。



    3 测定方法



    3.1 方法提要

    以丙酮提取样品中赤霉素,然后用乙酸乙酯提取,再用缓冲溶液反提取后,在薄层层析板上除去干扰物质,最后用荧光分光光度法测定。

    3.2 试剂和材料

    3.2.1 丙酮：分析纯。

    3.2.2 乙酸乙酯：分析纯。

    3.2.3 硫酸：优级纯。

    3.2.4 硫酸溶液：50%(V/V)。

    3.2.5 乙醇：分析纯。

    3.2.6 甲醇：分析纯。

    3.2.7 缓冲溶液(pH7)：溶解6.7g分析纯磷酸二氢钾和1.2g分析纯氢氧化钠在1 000mL蒸馏水中。

    3.2.8 展开剂：氯仿－乙酸乙酯－冰乙酸(10＋4＋1.6)。

    3.2.9 乙醇－硫酸溶液：(9＋1)。

    3.2.10 硫酸溶液：85%(V/V),将85mL硫酸缓慢加入15mL蒸馏水中。

    3.2.11 硅胶G：薄层层析用。

    3.2.12 赤霉素标准品：纯度≥95%。

    3.2.13 赤霉素标准溶液：准确称取适量的赤霉素标准品,用甲醇配成浓度1.00mg/mL的标准储备溶液,根据需要再配成适当浓度的标准工作溶液。

    3.3 仪器和设备

    3.3.1 荧光分光光度计：备有10mm石英池。

    3.3.2 锥形瓶：具磨口塞,500mL。

    3.3.3 组织捣碎机。

    3.3.4 布氏漏斗。

    3.3.5 振荡机

    3.3.6 圆底烧瓶：1 000mL。

    3.3.7 酸度计。

    3.3.8 旋转蒸发器。

    3.3.9 分液漏斗：250mL。

    3.3.10 涡旋混合器。

    3.3.11 离心管：具磨口塞,5mL、10mL。

    3.3.12 紫外灯：发射波长365nm。

    3.3.13 硅胶薄层板的涂布：在20cm×20cm玻璃层析板上将硅胶G(硅胶－水＝1＋3)涂布成0.3mm的薄层板,自然干燥30min。于110℃烘箱中活化1h,冷却后放置干燥器中备用。

    3.3.14 微量注射器：25μL。

    3.4 测定步骤

    3.4.1 提取

    称取试样100g(精确到0.1g)于锥形瓶内,加20mL蒸馏水和125mL丙酮,振荡30min。混合物经布氏漏斗抽滤；试样和残渣放回锥形瓶中,再用125mL丙酮重复振荡15min,再以铺有新滤纸的布氏漏斗抽滤。用50mL丙酮洗涤锥形瓶并倒在滤渣上,抽滤,再用100mL丙酮洗涤残渣并过滤。

    3.4.2 净化

    将丙酮－水提取液收集于1 000mL圆底烧瓶中,在30℃水浴上,用旋转蒸发器减压蒸发至丙酮完全除去。剩下的试样水溶液用折叠滤纸过滤,用50mL蒸馏水洗涤烧瓶并通过同一滤器过滤,再用2×10mL蒸馏水洗涤滤纸。将滤液转入烧杯中,滴加50%的硫酸溶液,调至pH为2.5±0.2。将样液定量转入250mL分液漏斗中,以少量蒸馏水洗涤烧杯。然后用3×50mL乙酸乙酯提取,收集乙酸乙酯提取液于第二个分液漏斗中。再用3×50mLpH7的缓冲溶液提取。弃去乙酸乙酯相。收集缓冲溶液提取液于250mL烧杯中,用50%的硫酸溶液调至pH2.5±0.2,再将溶液转入第三个250mL分液漏斗中,用3×50mL乙酸乙酯提取。

    收集乙酸乙酯相,并通过折叠滤纸滤入250mL圆底烧瓶中,于30℃水浴中旋转蒸发至干。准确加入1.0mL乙酸乙酯以溶解残留物。立即转入5mL离心管,冰浴冷却5min,以2500r/min离心5min。

    3.4.3 薄层分离

    在制备好的硅胶薄层板上,离底部2cm的线上分别点加25μL样液和10μL赤霉素标准溶液(10μL/mL)。自然干燥后放入装有新配制的氯仿－乙酸乙酯－冰乙酸(10＋4＋1.6)展开剂的密闭槽内,让展开剂上行展开15cm取出。自然干燥后,用玻璃板遮住薄层展开后的样品部分,用乙醇－硫酸(9＋1)溶液喷撒薄层展开后的标准样品部位,于100℃烘箱中加热10min。冷却后,在暗室的紫外灯(发射波长365nm)下观察,以此来对照标出样品部分相应的赤霉素组分区。将样品的赤霉素组分区域刮下,转入10mL离心管中,加1mL蒸馏水,混合、溶解,置冰浴中冷却5min。同时吸取2.0mL标准溶液(含赤霉素2μg)到第二个试管中,冰浴冷却5min,在每个试管中加入5mL已冷却的85%硫酸,继续在冰浴中冷却10min。取出试管,室温静置1h。供荧光分光光度法测定。

    3.4.4 测定

    3.4.4.1 荧光条件

    a. 激发波长：416nm。

    b. 发射波长：462nm。

    3.4.4.2 荧光测定

    分别将新制备的样品溶液和标准溶液装入清洁的石英池中,依次放入仪器内,测定每个溶液的荧光强度。

    3.4.5 空白试验

    除不加样品外,按上述测定步骤进行。

    3.4.6 结果计算和表述

    按下式计算：

    E·c·V

    X＝────

    Es·m

    式中：X——试样中赤霉素残留量,mg/kg；

    E——样液中赤霉素的荧光强度；

    Es——标准工作溶液中赤霉素的荧光强度；

    c——标准工作溶液中赤霉素的浓度,μg/mL；

    V——样液最终定容体积；

    m——最终样液中所代表的试样量,g。

    注：计算结果需扣除空白值。



    4 方法的测定低限、回收率



    4.1 测定低限:

    本方法测定低限为0.03mg/kg。

    4.2 回收率

    回收率的实验数据：赤霉素添加浓度在0.03～0.2mg/kg范围内,回收率为87.7%～94.3%。